Трактат о спорынье.

Трактат о спорынье.

Содержание
1. Спорынья - сырьё для синтеза LSD.
2. Выращивание культуры спорыньи.
3. Выращивание и извлечение алколоидов спорыньи.
4. Метод количественного определения эрготамина в спорынье.
5. Химическое изучение алколоидов дикорастущей и культивируемой спорыньи.
6. Метод получения препарата эрготамин тартрат из рожков спорыньи.
7. Получение диэтиламида изолизергиновой и лизергиновой кислот.
8. Венгерский способ получения алкалоидов.
9. Первоисточники.

Спорынья - сырье для синтеза LSD.

Читая книгу А. Данилина "LSD: галлюциногены, психоделия и феномен зависимости" я наткнулся на очень интересное место, где описывалась книга, изданная очень давно, в которой, по словам Данилина, можно найти много разных описаний растений, в том числе и галлюциногенов и даже спорыньи - грибка, поражающего рожь, который является ядовитым и токсичным, но также является исходным сырьем для получения LSD. Стоит хотя бы заметить, что "отец" LSD - Альберт Хофманн получил LSD именно из спорыньи Всем, кому интересна эта тема, я крайне рекомендую постараться найти эту книгу. Может, не в продаже, но хотя бы в крупной библиотеке. Можно выискать нужные страницы и сделать ксерокопии. Сам я еще не пытался искать эту книгу. Вот, только что (08.06.02) дочитал до конца книгу Данилина и думаю, что надо бы отправиться на поиски той "Энциклопедии растений". Ниже привожу цитату из книги Данилина (стр. 408-409).

В 1951 году в Государственном издательстве сельскохозяйственной литературы тиражом в 25 тыс. экземпляров вышел "Энциклопедический словарь лекарственных эфирно-масличных и ядовитых растений". С момента своего выхода и до сегодняшнего дня этот словарь является азбукой и энциклопедией отечественных наркоманов, торговцев наркотиками и производителей химического зелья.
И сегодня юные наркоманы 17-18 лет скажут вам, что они читали или что "им показывали ту самую научную книжку". До сих пор торговцы наркотиками используют для убеждения новичков различные статьи "Словаря", показывая тем самым, что если ученые пишут о наркотиках спокойным академическим языком, то ничего страшного и опасного в них нет. Даже в 60-70-е годы, когда большая часть населения страны не имела никакого представления о том, что такое валюта, эта книга у букинистов стоила 50 долларов (причем продавали ее именно за наличные доллары, а не за их рублевый эквивалент). Опытные товароведы книжного антиквариата расскажут вам, что все годы, прошедшие после выхода в свет, "Словарь" искали и покупали только те самые "несуществующие" наркоманы. В "Энциклопедическом словаре", в частности, приводится вполне достаточная информация по сбору, обработке и химическому составу спорыньи. Эта информация ничего не даст человеку неподготовленному, но профессиональный химик на ее основе сможет достаточно легко синтезировать различные изомеры лизергиновой кислоты. Химическая промышленность в те годы в нашей стране была развита очень хорошо, экспериментальных химических лабораторий и НИИ тоже было достаточно. Некоторые из них уже в самом начале 70-х годов начали выпуск небольших количеств LSD-25. Появившийся среди отечественных диссидентствующих интеллектуалов спрос почти автоматически порождал предложение. Возникшая еще в 70-е годы ситуация до сих пор не претерпела качественных изменений. Большая часть LSD, которая появляется в наших танцевальных клубах, производится отечественными химическими лабораториями по принятым с 70-х годов технологиям. Только подобных лабораторий сегодня гораздо больше, и речь, разумеется, идет о совершенно других деньгах. Необходимо предупредить покупателей отечественного "товара", что методы химической очистки алкалоидов спорыньи подпольными лабораториями оставляют желать лучшего. В порошке, который производится ими, могут содержаться вещества, вызывающие смертельно опасное заболевание - эрготизм.
Правда, еще большую опасность этого заболевания, вызывающего судороги, паралич и смерть, приносит употребление в сыром виде произрастающих в средней полосе России галлюциногенных грибов. Об этой опасности предупреждает и "Энциклопедический словарь". Но разве для отечественных наркоманов такого рода предупреждения играют какую-нибудь роль? Даже наоборот - они провоцировали на эксперименты с "запретным плодом"...

Выращивание культуры спорыньи.

Выращивать из спорыньи, естественно. Её собирают на полях, где рожь растёт, это такие тёмненькие наростики на некоторых колосках. А с таблетками всякими не возитесь, по этому пути уже шли люди и обломались. Желто-коричневые шаровидные склероции диаметром 2-4мм собирают осенью с кормового злака Paspalum dilatatum. Их тщательно очищают щеткой, затем встряхивают в следующих растворителях (точно соблюдая время обработки):
1. 50%-ный н-пропанол (2мин.)
2. 4%-ный раствор формалина (2мин.)
3. Стерильная дистиллированная вода (промыть 3 раза).
Затем от склероциев отделяют тонкие сегменты, их наносят на скошенный агар в пробирках и выдерживают при 25С. Прорастание обычно происходит на 4-8-й день. Мицелий на агаре имеет цвет от желтовато-белого до светло-коричневого, поверхность похожа на вату. Всхожесть склероциев- около 90%.
Через 14 дней выращивания вегетативный мицелий растирают стерильно в ступке и переносят в колбу Эрленмейера на 100мл с 25мл питательной среды NL563 (или колбу на 500мл со 100мл среды). Через 5-6 суток мицелий отделяют фильтрацией в асептических условиях (он образует шарики коричневого цвета) и тщательно промывают стерильной водой. Каждую 1/4 часть отмытого мицелия переносят в такие же колбы с таким же количеством ферментационной среды NL500. После 7-суточного культивирования ферментацию прекращают, мицелий отфильтровывают (его шарики достигают размера 3-4мм, жидкость к концу ферментации имеет цвет от светло-желтого до коричневого) и выделяют алкалоиды, подщелачивая культуральную жидкость и взбалтывая ее с равным количеством хлороформа. Содержание алкалоидов в культуральной жидкости 100-150мкг/мл, в склероциях спорыньи- 0.006%.
Состав сред:
1.Агар:
Кукурузный экстракт (твердые вещества Staley)- 10 г.

Кукурузный сироп (твердые вещества Staley) - 5 г. Сахароза - 10 г.
KH2PO4 - 0.5г.

MgSO4*7H2O - 0.3г. Агар - 20 г.
Дистилл. вода до 1000мл. 2.NL563 (предварительная):
Кукурузный экстракт (твердые вещества Staley)- 20 г. Кукурузный сироп (твердые вещества Staley) - 10 г. Сахароза - 20 г.
KH2PO4 - 1 г.

MgSO4*7H2O - 0.3г. Дистилл. вода до 1000мл. 3.NL500 (ферментационная): Сукцинат аммония - 30 г. Маннит - 30 г.
KH2PO4 - 1 г.

MgSO4*7H2O - 0.3г.
1,2 пропандиол - 30 мл.
Дистилл. вода до 1000мл. (довести PH до 5.1 10%-ной соляной кислотой).
(Грегер Д., Ерге Д. Образование производных лизергиновой кислоты в глубинной культуре claviceps paspali Stevens et Hall. Микробиология, 1966, Т.35, Вып.4, С.606-611.)

Лето не за горами, злаковые скоро заколосятся и на них не смотря на любые постановления образуются темно-фиолетовые склероции. Их то и надо вдоволь запасти, причем каждый штамм стоит хранить отдельно и подписанным. Это пригодиться для выявления наиболее алкалоидонасышенной культуры. Долгими зимними вечерами ее можно будет выращивать дома.
Метода1. (Микробиология, 1966,т.25,вып.4,с.606-611"Образование производных лизергиновой к-ты в глубинной культуре Claviceps paspali" Грегер Д., Ерге Д.)
1. Обработка склероциев от посторонней микрофлоры:
а) 50% н-пропанол 2 мин;
б) 4% р-р формалина 2 мин;
в) стерильная дист. вода - промыть 3 раза.
2. Затем, в стерильных условиях (обкварцованное помещение без сквозняков, перчатки, маска, горелка) от склероциев отделяют тонкие сегменты, их наносят на скошенный агар в пробирках и выдерживают при 25"С. Прорастание обычно происходит на 4-8 день. Мицелий на агаре имеет цвет от желтовато-белого до светлокоричневого, поверхность похожа на вату. Всхожесть около 90%. Через 14 дней выращивания вегетативный мицелий растирают (стерильно) в ступке и переносят в колбу Эрленмейра объемом 100мл с 25мл питательной среды NL563 (или колба на 500мл со 100мл среды). Через 5-6 суток мицелий отделяют фильтрацией в асептических условиях (он образует шарики коричневого цвета) и тщательно промывают водой. Каждую четверть отмытого мицелия переносят в такие же колбы с таким же кол-ом пит. среды NL500. После 7 суточного культивирования ферментацию прекращают, мицелий отфильтровывают (его шарики достигают размера 3-4 мм, жидкость к концу ферментации имеет цвет от светло-желтого до коричневого) и выделяют алкалоиды, подщелачивая культуральную жидкость и взбалтывая ее с равным кол-ом хлороформа.
Содержание алкалоидов в культуральной жидкости 100-150мкг/мл, в склероциях спорыньи 0,006%. Склероции брались с растения Paspalum dilatatum (злаковые, по-моему гречиха, но не факт).

Выращивание и извлечение алкалоидов спорыньи

Выращивание и извлечение алкалоидов спорыньи
Делаем культуральную среду, смешивая следующие компоненты с 500мл
дистиллированной воды в 2л узкогорлой колбе:
Ca(NO3)2 - 1g
KH2PO4 - 0,25g MgSO4 - 0,25g KCl - 0,125g
Fe2(SO4)3*6H2O - 8,34mg ZnSO4 - 3,44mg
сахароза - 100g
мука куриных эмбрионов - 50g

Затем довести объем среды до 1л устанавливая pH4 с помощью раствора NH4OH и лимонной кислоты. Приготовленная среда стерилизуется в автоклаве. Далее засевают среду предварительно обработанной (как в методе Грегера и Ерге) культурой Claviceps purpurea. Потом затыкается это дело пробкой из стерильного хлопка и инкубируется 2 недели. Периодически проверяют pH и поддерживают его в районе pH4.
Через 2 недели культура будет визуально наблюдатся;) Это маточная среда. Берем несколько одинаковых емкостей(колб) объемом на 1 галон с резиновой пробкой. В пробке делаем 2 отверстия, в которые вставляем 2 стеклянные трубки - короткую и длинную. В верхнюю часть длинной вставляют пробку-фильтр из стерильного хлопка и резиновой трубкой подсоединяют к компрессору (для аквариумов). Короткую трубку присоединяют (через резиновую) к длинной трубке колбы Эрленмейра, которая также с двумя стеклянными трубками разной длины и в которой находится гипохлорид натрия.
Таким макаром среда с культурой C.purpurea успешно аэрируется (т.к. они аэробы) и поддерживается чистота культуры.
Но это все потом. Сначала ферментер разбираем и, упаковав в крафт-пакеты, стерилизуем в автоклаве. 1-галонные колбы заполняются средой тогоже состава на 2/3 - 3/4 объема и тоже автоклавируются. Делее в стерильных условиях заражаем 1-галонные колбы маточной средой, собираем ферментер и включаем компрессор. Должны наблюдатся пузырьки воздуха, проходящие через культуральную среду. Оставляем процесс на 10 дней при t=25"C в достаточно темном месте.
Через 10 дней делаем культуральную среду 1% спиртовой, добавив соответствующее количество 95% этанола. Оставляем еще на 2 недели. После 24 дней выращивание прекращают. добавляют к среде 2% винную к-ту, перемешивают и оставляют на час. Затем защелачивают раствор до pH9 с помощью NH4OH и экстрагируют алкалоиды бензолом или смесью хлороформа и изобутанола. После снова экстрактируют 2% спиртовым р-ром винной к-ты и сушат под вакуумом. Получаем тартрат алкалоидов наиболее подходящую для хранения форму. Перед дальнейшим синтезом их необходимо перевести в свободную форму.
От себя хочется добавить, что стерилизации входящего воздуха лучше использовать бактерицидную лампу, помещенную в трубу. Помоему так
надежней.

Метод количественного определения эрготамина в спорынье

Метод количественного определения эрготамина в спорынье
Порошок спорыньи обезжиривают петролейным эфиром в аппарате Сокслета; из обезжиренной спорыньи алкалоиды экстрагируют диэтиловым эфиром. Разделение алкалоидов проводят хроматографией на бумаге, импрегнированной формамидом, в системе бензолпетролейный эфир (6:1). Эрготамин с бумаги элуируют 1% водным рром винной к-ты. (нужный сектор видимо определяют УФ-освещением) Содержание его в элюате определяют колориметрическим методом с раствором n-диметиламинобензальдегида в серной к-те. Колориметрирование проводят на фотоэлектроколориметре (ФЭК). Точность +-5,5%
По поводу петролейного эфира. Это смесь фракций C5 - C6 t кип 2060"CC5 фракция: н-пентан(t кип=36"C), изопентан(t кип=28"C), неопентан(t кип=9.5"C)
Наиболее высокое содержание алкалоидов отмечено для спорыньи, паразитирующей на пырее, житняке, еже сборной, лисохвосте луговом. Эти и многие другие растения я скоро выложу в виде инет атласа-определителя высших растений. Безалкалоидная раса спорыньи паразитирует на мышее(?), райграсе, паспалум(спорное заявление). На лисохвосте луговом паразитирует раса, продуцирующая в большом количестве эргозин (40-80% от суммы). Исследования спорыньи с пшенично-пырейных и ржано-пырейных гибридов показали, что, как и на ржаной спорынье, паразитируют, главным образом, безалкалоидные расы(?).

Химическое изучение алалоидов дикорастущей и культивируемой спорыньи.
Взято из Ленинской библиотеки. Дню рождения В.И.Ленина посвящается.
Метод получения диэтиламида d-лизергиновой кислоты из суммы алкалоидов спорыньи.
Баньковская А.Н., "Химическое изучение
алалоидов дикорастущей и культивируемой спорыньи и разработка методов получения препаратов.", М., 1966г. шифр: Др
.
..Для повышения выхода продукта и получения более чистого препарата нами были внесены изменения на стадии получения гидразида рацемической изолизергиновой к-ты. Для отделения гидразида рацемической изолизергиновой к-ты от пептидной части молекулы алкалоидов, мы применили дополнительную обработку гидразингидратом и абсолютным спиртом. Гидразид в этом случае получается более чистый и выходы на последующих стадиях значительно выше.
Стадии получения:
1. Получение гидразида рацемической изолизергиновой кислоты;
2. Получение гидразида d-изолизергиновой кислоты;
3. Получение азида d-изолизергиновой кислоты;
4. Получение диэтиламида d-лизергиновой кислоты.

Применение в качестве исходного сырья суммы алкалоидов, а не эрготамина, а также введение дополнительной обработки на первой стадии получения, позволили повысить выход продукта и значительно снизить его стоимость...
Схема:
сумма алкалоидов спорыньи + гидразина гидрат(t) d-C15H15N2-CO-NH-R + NH2-NH2 (+кипячение в абсолютном спирте) -> ->гидразид рацемической изолизергиновой кислоты d,l-C15H15N2-CO-NH-NH2 + ди-(n-толуил)-l-винная кислота -> ->гидразид d-изолизергиновой к-ты + азотистая к-та d-C15H15N2-CO-NH-NH2 + HNO2(HCl+NaNO2 t=0"C) ->азид экстагируют эфиром, эфирный слой высушивают (вакуум?)-> ->азид d-изолизергиновой кислоты + диэтиламин d-C15H15N2-CON3 + HN(C2H5)2 -> рацемат из 50% диэтиламида d-лизергиновой к-ты и 50% диэтиламида d-изолизергиновой к-ты.

Все. Далее видимо экстракция в бензол или эфир, подсушивание безводным Na2SO4, фильтрация и получение тартрата, путем титрования винной к-ой под контролем индикатора. Да, и необходимо соблюдать световой режим: на всех стадиях, кроме последней, - красный свет, на последней - желтый.
P.S.: похоже все содрано у Хоффмана. В 27 декабря 1965г она, ее муж и сотоварищи подала заявку на авторское свидетельство №970325 "Способ получения диэтиламида d-лизергиновой к-ты"

Метод получения препарата "эрготамин тартрат" из рожков спорыньи.

Выведение индивидуальных алкалоидов спорыньи представляет трудности из-за их большой чувствительности к воздействию кислот и щелочей, света, t, кислорода, воздуха. На основе проведенных исследований...

Метод получения препарата "эрготамин тартрат" из рожков спорыньи эрготаминового штамма

Выведение индивидуальных алкалоидов спорыньи представляет трудности из-за их большой чувствительности к воздействию кислот и щелочей, света, t, кислорода, воздуха. На основе проведенных исследований нами предложен метод получения алкалоида основанный на извлечении их из сырья дихлорэтаном без предварительного обезжиривания. Из дихлорэтанового экстракта алкалоиды извлекают 2% р-ром винной кислоты. Из винного извлечения алкалоиды после подщелачивания экстрагируют хлороформом, растворитель упаривают и алкалоиды осаждают петролейным эфиром. выходы на отдельных стадиях:
Измельчение растительного сырья 92,6%
Экстракция алкалоидов из сырья дихлорэтаном 93,3%
Извлечение алкалоидов винной кислотой 97,5%
Получение суммы алкалоидов 89,3%
Общий выход 81,25%

В связи с тем, что эрготамина тартрат нельзя перекристализовать, т.к. при нагревании в растворах он переходит в правовращающий изомер эрготаминин, для освобождения от сопутствующих алкалоидов и баластных веществ добавлены следующие этапы:
Получение сульфата
Экстракция в бензол
Экстракция в воду+ацетон
Получение тартрата
Общий выход 52,5%

Получение диэтиламида изолизергиновой и лизергиновой кислот

1. Получение гидразида изолизергиновой кислоты. Можно использовать один из известных алкалоидов спорыньи, или их смесь. При нижеследующих условиях не расщепляются гидразином только алкалоиды типа эргобазин. 10г высушенного в высоком вакууме эрготамина нагреваются с с 10мл безводного гидразина в круглой колбе с притертым обратным холодильником на масляной бане до несильного кипения (130-140С). В течение 10мин. алкалоид полностью растворяется. Кипятить еще 20мин., затем разбавить горячий раствор 5.6мл воды, чтобы перевести гидразин в гидразингидрат. Гидразид изолизергиновой кислоты в этой форме намного менее растворим, чем в безводном гидразине, и сразу начинает осаждаться в виде почти бесцветных кристаллов. После 15мин. дальнейшего кипячения раствор следует охладить и для завершения кристаллизации дать постоять еще 6 часов. Выкристаллизовавшийся гидразид отсасывается и промывается небольшим количеством чистого спирта. Выход 3.4г (70%) почти чистого гидразида изолизергиновой кислоты. Однократная перекристаллизация из 300кратного количества кипящего спирта, из которого соединение осаждается в виде прозрачных 6-угольных пластинок, дает аналитически чистый препарат. При 240С он нерезко плавится с разложением.
2. Превращение гидразида изолизергиновой кислоты в гидразид лизергиновой кислоты. Гидразиды изолизергиновой кислоты можно перевести в дериваты лизергиновой кислоты как путем кипячения со спиртовой фосфорной кислотой, так и мягким действием спиртовой щелочи, причем последний путь оказался особо выгодным. 10г гидразида изолизергиновой кислоты при нагревании растворяются в 200мл чистого этилового спирта, раствор быстро выпаривается в вакууме до 40мл и тот час же, прежде, чем начнется кристаллизация, смешивается с 4мл 4-n. 50%-ной водно-спиртовой калийной щелочи. При стоянии в темноте при комнатной температуре гидразид лизергиновой кислоты через час начинает кристаллизоваться в длинные, соединяющиеся в пучки иглы. Через день превратившееся в густую кристаллическую кашу вещество отсасывается и промывается небольшим количеством чистого спирта. Выход 6г чистого гидразида лизергиновой кислоты. Гидразид лизергиновой кислоты очень трудно растворим в воде, эфире и бензоле.
3.Превращение гидразида изолизергиновой кислоты в азид. 2.82г (0.01моль) мелко измельченного (до порошка) гидразида изолизергиновой кислоты (в прохладных условиях) растворяются в 100мл 0.1n. соляной кислоты. Охлаждают до 0С и добавляют непрерывной струей 10.0мл 1n. холодного раствора нитрита натрия, после чего при интенсивном помешивании тотчас же и в течение 2-3 минут добавляют более чем 100мл 0.1n. соляной кислоты, до тех пор, пока раствор отчетливо кисло среагирует на лакмусовой бумаге. Для завершения почти моментально протекающего превращения в азид дают постоять еще 5 минут при 0С, добавляют слой из 300мл эфира, смешивают с избыточным 1n. раствором гидрокарбоната натрия и путем встряхивания переводят светло-желтые, объемистые хлопья азида в эфир. Гидрокарбонатный щелочной маточный раствор встряхивают второй раз с 50мл эфира. Соединенные эфирные растворы промываются еще 2 раза 20мл воды и потом в защищенных от света условиях в течение 15-20мин. высушиваются при 0С прокаленным карбонатом калия.
4. Получение диэтиламида изолизергиновой и лизергиновой кислот (всегда получается смесь изомеров, хотя значительно преобладает тот из них, который был исходным). Полученный из 1.0г гидразида изолизергиновой кислоты эфирный раствор азида смешивали с 3.0 куб.см диэтиламина и давали постоять при 20С ночь. Вообще-то диметиламид ЛК тоже психоактивен, примерно 70% активности ДЛК. Только вот сложно все это. Гидразин безводный, скажем, где возьмешь? Из мочевины и гипохлорита натрия - в лучшем случае гидразингидрат. А эрготамин? Имея доступ к хроматографу можно конечно выделить его из "беллоида". Короче, лабораторные условия нужны как минимум.

Венгерский способ получения алкалоидов

1. Измельченную спорынью обезжиривают петролейным эфиром.
2. Смешивают с суспензией окиси магния (MgO магнезия жженая) в воде и алкалоиды экстрагируют бензолом.
3. Из бензольного экстракта алкалоиды извлекают 2% винной кислотой.
4. Из винного извлечения алкалоиды в виде тартратов высаливают NaCl
5. Осадок смешивают с окисью магния и алкалоиды извлекали хлороформом.
6. Хлороформный экстракт сушат безводным Na2SO4 и хлороформ упаривают в вакууме в токе CO2 при t не выше 60"C.
Остаток вливают в 5-кратное кол-во петролейного эфира, выпавшие
в осадок алкалоиды, в виде хлопьевидного осадка, отфильтровывают и сушат.

Первоисточники:
1. Спорынья - сырьё для синтеза LSD. http://lsdinfo.by.ru/ergot_info1.html
2. Выращивание культуры спорыньи. http://ssb.h1.ru/sporiniya.htm
3. Выращивание и извлечение алколоидов спорыньи. http://ssb.h1.ru/ergot_cultur.htm
4. Метод количественного определения эрготамина в спорынье. http://ssb.h1.ru/test_ergot.htm
5. Химическое изучение алколоидов дикорастущей и культивируемой спорыньи. http://ssb.h1.ru/dietilamid_d_la.htm
6. Метод получения препарата эрготамин тартрат из рожков спорыньи. http://spaceflower3.tripod.com/
7. Получение диэтиламида изолизергиновой и лизергиновой кислот. http://ssb.h1.ru/dietilamid_la.htm
8. Венгерский способ получения алкалоидов. http://ssb.h1.ru/venger.htm